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核黄素溶液存放多久

作者：佚名发布时间：2024-07-07 23:42:07

氮蓝四唑（NBT）法测定超氧物歧化酶（SOD）活力

一、原理

超氧物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶。本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2，可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除O2，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。

二、材料、仪器设备及试剂

（一）材料；水稻或小麦叶片

（二）仪器设备：1.高速台式离心机；2.分光光度计；3.微量进样器；4.荧光灯（反应试管处照度为4000Lx）；5.试管或指形管数支。

（三）试剂

1. 0.05mol/L 磷酸缓冲液（pH7.8）；

2. 130mmol/L 甲硫氨老迟酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml；

3.750μmol/L 氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存；

4. 100μmol/L EDTA－Na2溶液：称取0.03721gEDTA－Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml；

5. 20μmol/L 核黄素溶液：称取0.0753g核黄素用蒸馏水定容至1000ml避光保存。

三、实验步骤

1. 酶液提取取一定部位的植物叶片（视需要定，去叶脉）0.5g于预冷的研钵中，1ml预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使终体积为5ml。取1.5～2ml于1000rpm下离心20min，上清液即为SOD粗提液。

2. 显色反应取5ml指形管（要求透明度好）4支，2支为测定管，另2支为对照管，按下列加入各溶液：试剂（酶）用量（ml）终浓度（比色时）0.05mol/L 磷酸缓冲液1.5130mmol/L Met溶液0.313mmol/L 750μmol/L NBT溶液0.375μmol/L 100μmol/L EDTA－Na2液0.310μmol/L 20μmol/L 核黄素0.320μmol/L 酶液0.052支对照管以缓冲液代替酶液蒸馏水0.25总体积3.0混匀后笑困将1支对照管置暗处，其它各管于4000Lx日光下反应20min（要求各管受光情况一致，温度高时间缩短，低时延长）。

3. SOD活性测定与计算至反应结束后，以不照光的对照管做碰含念空白，分别测定其它各管的吸光度。

四、结果计算

已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50％为一个酶活性单位表示，按下式计算SOD活性。SOD总活性＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt)

上式中，SOD比活力＝SOD总活性蛋白质含量式中SOD总活性以每克鲜重酶单位表示；比活力单位以酶单位／mg蛋白表示Ack照光对照管的吸光度AE样品管的吸光度V样品液总体积（ml）Vt测定时样品用量（ml）W样鲜重（g）蛋白质含量单位为：mg蛋白／g鲜重。

维生素b2要避光保存吗

维生素B2是人体中一种需要外界供给的维生素，在日常使用食物中如乳类、鱼类、肉类绿叶蔬菜及谷类中广泛存在。许多人会选择更加快捷的如服用维生素B2药片等的方法来补充维生素B2，这时维生素B2的保存就成个问题了。那么，维生素B2要避光保存吗？

维生素B2要避光保存吗

维生素B2是人体必需的一种易消化吸收水溶性维生素，但是这种维生素需要外界供给，在日常使用食物中如毁银乳类、鱼类、肉类绿叶蔬菜及谷类中广泛存在。通常微度缺乏维生素B2不会有什么明显的症状出现。当人体缺乏维生素B2时会引起粘膜病变，造成粘膜细胞代谢失调。

有人会问，维生素B2要避光保存吗?的确，维生素B2对光很敏感，所以保存时最好放在不透明或者是深颜色的容器内，以免接触到阳光，因为维生素B2在光照条件下且暴露于空气中会被快速氧化而失效，所以，每次服药后都应把瓶盖拧紧，置于避光阴凉干燥处储存，并且主意要在有效期内服用。

维生素B2的保存

维生素B2又叫做核黄素，它的热稳定性比较好，而且能够耐酸，在中性和酸性溶液中短期加热也不致会被破坏。但是，维生素B2并不耐碱，在碱性溶液中加热会很大程度被破坏，造成失效。野茄维生素B2对紫外线同样敏感，需要避免阳光直射，注意避光保存。

食物中的核黄素主要是结合型的，对光比较稳定。此外，在烹调食物的时候也应该注意尽量避免与碱性的溶液一起烹调，加热的时间也不适宜过长，以免食物中的维生素B2流失过多，造成人体的维生素B2的摄入量不够。缺少维生素B2过多的时候，会引起颂余察一系列的症状。

核黄素简介

目录 1 拼音2 英文参考3 概述4 核黄素的来源5 缺乏核黄素所引起的疾病6 核黄素的食品添加剂用途7 核黄素医学检查 7.1 分类7.2 原理7.3 试剂7.4 操作方法7.5 正常值7.6 临床意义7.7 附注7.8 相关疾病 8 维生素B2药典标准 8.1 品名 8.1.1 中文名8.1.2 汉语拼音8.1.3 英文名 8.2 结构式8.3 分子式与分子量8.4 来源（名称）、含量（效价）8.5 性状 8.5.1 比旋度 8.6 鉴别8.7 检查 8.7.1 酸堿度8.7.2 感光黄素8.7.3 有关物质8.7.4 干燥失重8.7.5 炽灼残渣 8.8 含量测定 8.8.1 色谱条件与系统适用性试验8.8.2 测定法 8.9 类别8.10 贮藏8.11 制剂8.12 版本 9 药品说明书 9.1 核黄素的别名9.2 外文名9.3 适应症9.4 用量用法9.5 注意事项9.6 规格 10 参考资料附： * 核黄素相关药品说明书其它版本 1 拼音

hé huáng sù

2 英文参考

lactoflavin [21世纪双语科技词典]

ovoflavin [21世纪双语科技词典]

riboflavin [WS/T 476—2015 营养名词术语]

3 概述

核黄素（riboflavin）又称维生素B2（vitamin B2），是B族维生素之一[1]。在体内，以黄素腺嘌呤二核苷酸、黄素单核苷酸作为辅基与特定蛋白质结合，形成黄素蛋白，参与体内氧化还原反应和能量代谢[1]。

纯的维生素B2为橙黄色结晶，溶于水，在紫外线照射下有黄绿色荧光，耐热，耐酸，不耐堿，对光敏感。食物中维生素 B2多与磷酸和蛋白质结合，对光较稳定。[2]

维生素B2（vitamin B2）是核醇与7，8二甲基异咯嗪的缩合物，属水溶性维生素。维生素B2在体内以游离核黄素、黄素单核苷酸（flavin mononucleotide，FMN）及黄素腺嘌呤二核苷酸（flavin adenine dinucleotide，FAD）3种形式存在于组织，构成体内许多黄酶中的辅酶。

4 核黄素的来源

人体所需要的维生素B2主要依赖于食物中供给，牛奶、鸡蛋含维生素B2比较丰富，绿色蔬菜中也有，但植物性食品的维生素B2含量不高。

一般动物性食品中维生素B2含量高，又以肝、肾、心最多；植物性食品中，以绿叶蔬菜、豆类中含量较高，谷类和一般蔬菜含量少。

5 缺乏核黄素所引起的疾病

维生素B2的主要功能是构成黄酶的辅酶，参加物质代谢和能量代谢。缺乏维生素B2时许多酶的活性降低，线粒体中氧化速率下降，直接影响了能量代谢。因此它是维持机体正常生长所必需的维生素。

缺乏B2可引起阴囊炎、舌炎、唇炎、口角炎、脂溢性皮炎、睑缘炎。

6 核黄素的食品添加剂用途

维生素B2可作为营养强化剂用在植物蛋白饮料（食品分类号：14.03.02）中，最大使用量1 mg/kg～3 mg/kg。[3]

7 核黄素医学检查7.1 分类

血液生化检查、血清维生素测定

7.2 原理

（1）全血红罩模颂细胞谷胱甘肽还原酶的活性系数（activity coeffieient of erythrocyte glutathione reductase，ACEGR）测定：维生素B2的衍生物黄素腺嘌码闭呤二核苷酸（FAD）是谷胱甘肽还原酶（EGR）的辅酶，可促进红细胞内氧物郑化型谷胱甘肽还原，同时还原型的辅酶Ⅱ被氧化，保持细胞正常的生理功能。当体内维生素B2缺乏时该酶的活性降低，而将维生素B2加入含有谷胱甘肽还原酶的红细胞溶血液中，可增加酶的活性。这种补充维生素B2后酶增加的活性与原有活性的比值即为EGR的活性系数（ACEGR）。

（2）尿维生素B2测定：维生素B2主要从尿中以游离形式排出，而维生素B2在440～500nm波长激发时产生黄绿色荧光，在稀溶液中荧光强度与维生素B2浓度成正比。故测定尿中维生素B2可反映体内维生素B2的营养状况。有多种方法，如24h尿维生素B2测定，1h尿维生素B2测定及维生素B2负荷试验。后者最常用的方法是口服5mg维生素B2后，收集4h尿样，测定尿中的维生素B2量。另外尚可收集任意尿，测定每克肌酐来表示尿中维生素B2的排出量。

7.3 试剂

同荧光分析法。

7.4 操作方法

同荧光分析法。

7.5 正常值

ACEGR的参考范围＜1.2，若＞1.4有诊断意义

尿维生素B2的排出量见表1。

7.6 临床意义

维生素B2缺乏（vitamin B2 deficiency）是常见的营养缺乏病。因维生素B2是维持人体正常生长所必须的因素，体内缺乏维生素B2对人体生理功能影响较大，涉及范围较广，常见是口腔及皮肤等部位出现异常，严重缺乏可导致生长停止。本病多数由于膳食中维生素B2供给不足或利用过多或吸收障碍而引起。因此可根据饮食中有维生素B2缺乏的病史及阴囊皮损、口腔症状、脂溢性皮炎而做出初步临床诊断，然后给以维生素B2治疗。

7.7 附注

实验室诊断方法的评价：

（1）以ACEGR作为人体维生素B2缺乏的特异性诊断指标可首选。此法具有用血量少，灵敏度高，方法稳定等优点，且能直接反映体内核黄素的代谢情况。

（2）虽然24h尿维生素B2测定能正确地查明一天尿中排出的维生素B2量，但尿量不易收集，尤其是小儿。可采用测空腹1h尿中维生素B2排出量，测得值再折算24h的排出量。

7.8 相关疾病

脂溢性皮炎

8 维生素B2药典标准8.1 品名8.1.1 中文名

维生素B2

8.1.2 汉语拼音

Weishengsu B2

8.1.3 英文名

Vitamin B2

8.2 结构式 8.3 分子式与分子量

C17H20N4O6376.37

8.4 来源（名称）、含量（效价）

本品为7,8二甲基10[（2S,3S,4R）2,3,4,5四羟基戊基]3,10二氢苯并蝶啶2,4二酮。按干燥品计算，含C17H20N4O6应为97.0%～103.0%。

8.5 性状

本品为橙黄色结晶性粉末；微臭，味微苦；溶液易变质，在堿性溶液中或遇光变质更快。

本品在水、乙醇、三氯甲烷或乙醚中几乎不溶；在稀氢氧化钠溶液中溶解。

8.5.1 比旋度

避光操作。取本品，精密称定，加无碳酸盐的0.05mo/L氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含5mg的溶液，在30分钟内，依法测定（2010年版药典二部附录Ⅵ E），比旋度为115°至135°。

8.6 鉴别

（1）取本品约1mg，加水100ml溶解后，溶液在透射光下显淡黄绿色并有强烈的黄绿色荧光；分成二份：一份中加无机酸或堿溶液，荧光即消失；另一份中加连二亚硫酸钠结晶少许，摇匀后，黄色即消褪，荧光亦消失。

（2）取含量测定项下的溶液，照紫外－可见分光光度法（2010年版药典二部附录Ⅳ A）测定，在267nm、375nm与444nm的波长处有最大吸收。375nm波长处的吸光度与267nm波长处的吸光度的比值应为0.31～0.33；444nm波长处的吸光度与267nm波长处的吸光度的比值应为0.36～0.39。

（3）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（《药品红外光谱集》447图）一致。

8.7 检查8.7.1 酸堿度

取本品0.50g，加水25ml，煮沸2分钟，放冷，滤过，取滤液10ml，加酚酞指示液0.05ml与氢氧化钠滴定液（0.01mol/L）0.4ml，显橙色，再加盐酸滴定液（0.01mol/L）0.5ml，显黄色，再加甲基红溶液（取甲基红50mg，加0.1mol/L氢氧化钠溶液1.86ml与乙醇50ml的混合液溶解，加水稀释至100ml，即得）0.15ml，显橙色。

8.7.2 感光黄素

取本品25mg，加无乙醇三氯甲烷10ml，振摇5分钟，滤过，滤液照紫外－可见分光光度法（2010年版药典二部附录Ⅳ A），在440nm的波长处测定，吸光度不得过0.016。

8.7.3 有关物质

避光操作。取本品约15mg，置100ml量瓶中，加冰醋酸5ml与水75ml，加热溶解后，加水适量稀释，放冷，再用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取1ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的3倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍（1.0%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积（2.0%）。供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.01倍的峰可忽略不计。

8.7.4 干燥失重

取本品0.5g，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过1.0%（2010年版药典二部附录Ⅷ L）。

8.7.5 炽灼残渣

不得过0.2%（2010年版药典二部附录Ⅷ N）。

8.8 含量测定

避光操作。照高效液相色谱法（2010年版药典二部附录Ⅴ D）测定。

8.8.1 色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.01mol/L庚烷磺酸钠的0.5%冰醋酸溶液－乙腈－甲醇（85：10：5）为流动相；检测波长为444nm。理论板数按维生素B2峰计算不低于2000。

8.8.2 测定法

取本品约15mg，精密称定，置500ml量瓶中，加冰醋酸5ml与水200ml，置水浴上加热，并时时振摇使溶解，加水适量稀释，放冷，再用水稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素B2对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

8.9 类别

维生素类药。